PCR實驗室又(you)叫基因(yin)擴增實驗室。PCR是聚合(he)酶(mei)鏈(lian)式(shi)反應(PolymeraseChainReaction)的簡稱。是一種分子生(sheng)物學技(ji)術，用于(yu)放大特(te)定的DNA片段，可看作生(sheng)物體外(wai)的特(te)殊DNA復(fu)制。通過(guo)DNA基因(yin)追蹤系統，能迅速掌握患(huan)(huan)者體內的病(bing)毒含量(liang)，其精確(que)度高達納米級別，精確(que)檢(jian)測乙肝病(bing)毒在患(huan)(huan)者體內存在的數量(liang)、是否復(fu)制、是否傳染(ran)、傳染(ran)性有多強、是否必要服(fu)藥(yao)、肝功能有否異常(chang)改變能及時(shi)判斷(duan)病(bing)人最適合(he)使用哪類抗病(bing)毒藥(yao)物、判斷(duan)藥(yao)物療效如何、給臨床(chuang)治療提供了可靠的檢(jian)驗依(yi)據。

　　開展PCR實驗室應具備的條件

　　1、必須擁有標準的的PCR熒光實(shi)驗室(shi);

　　實(shi)時(shi)熒光定(ding)量PCR技(ji)術于1996年由美國AppliedBiosystems公司推出　　由于該技(ji)術不僅(jin)實(shi)現(xian)了PCR從定(ding)性到定(ding)量的飛躍，而且與常(chang)規PCR相比，它(ta)有(you)特(te)異性更強、有(you)效(xiao)解決(jue)PCR污(wu)染(ran)問題、自動(dong)化(hua)程(cheng)度(du)高等特(te)點，目前已得到廣泛應用。

　　2、檢測(ce)設(she)備必(bi)須符合標(biao)準(zhun)PCR熒光實驗室設(she)置要求;

　　熒光定量PCR儀+實(shi)時熒光定量試(shi)劑+通用電腦+自動分析軟件(jian)，構成PCR-DNA/RNA實(shi)時熒光定量檢測系統。

　　3、必須(xu)通過國家臨(lin)床檢驗(yan)中心的驗(yan)收和認證;

　　4、檢測人員必(bi)須(xu)通過國家(jia)臨檢中心業務培訓(xun)并取得(de)合格證書;

　　PCR實(shi)驗(yan)室(shi)(shi)內工作人員必須(xu)參加(jia)由國家衛生(sheng)部(bu)或各(ge)省臨(lin)床(chuang)(chuang)檢驗(yan)中心舉辦的(de)(de)臨(lin)床(chuang)(chuang)基因擴增培(pei)訓(xun)班，并持(chi)證(zheng)上崗。PCR實(shi)驗(yan)室(shi)(shi)通(tong)過驗(yan)收，實(shi)驗(yan)室(shi)(shi)至少(shao)必須(xu)應有(you)兩個(ge)以上持(chi)有(you)“臨(lin)床(chuang)(chuang)基因檢測(ce)上崗證(zheng)”。PCR實(shi)驗(yan)室(shi)(shi)必須(xu)建立(li)(li)嚴格的(de)(de)實(shi)驗(yan)室(shi)(shi)管理制度、建立(li)(li)標準化操作程(cheng)序(SOP)、建立(li)(li)系列質(zhi)量管理文件等(deng)，確(que)保(bao)實(shi)驗(yan)室(shi)(shi)日常(chang)運行(xing)符合國家衛生(sheng)部(bu)的(de)(de)要求，確(que)保(bao)檢測(ce)結果準確(que)、確(que)保(bao)實(shi)驗(yan)室(shi)(shi)衛生(sheng)安全(quan)，確(que)保(bao)實(shi)驗(yan)室(shi)(shi)長期穩定運行(xing)

　　5、必須在(zai)無菌無塵環境下進行(xing)操作

　　下(xia)面介紹如(ru)何建立PCR實驗(yan)室

　　1、建立樣(yang)品準備區

　　這(zhe)個區域(yu)專門用作(zuo)樣品的(de)準備，在制備和(he)操作(zuo)用于核酸提取(qu)的(de)試劑時應(ying)該采(cai)取(qu)預(yu)防措施：

　　⑴PCR產物(wu)和帶(dai)有要擴增序列的DNA克(ke)隆不(bu)能在這個房間操(cao)作。

　　⑵組(zu)織培(pei)養(yang)物、組(zu)織標本和血清樣品都(dou)帶進樣品準備間處理，以根據應用的需要提取DNA或RNA。

　　⑶用于樣品處理的(de)工具不能被用作(zuo)普通分子克隆(long)的(de)工具，也不能用作(zuo)操(cao)作(zuo)靶(ba)序列。

　　⑷DNA樣(yang)品(pin)應該用有(you)專(zhuan)門的防護或正壓活塞(sai)式(shi)移(yi)液管操作，以防止在吸取樣(yang)品(pin)時有(you)氣溶(rong)膠遺(yi)留。

　　⑸大體積(ji)樣品(pin)應該用(yong)單獨(du)包(bao)裝的無(wu)菌一(yi)次(ci)性移(yi)液(ye)管吸(xi)取。

　　⑹管子(zi)打(da)開前都要(yao)簡短離心以減(jian)少氣(qi)溶膠的產生，而且管子(zi)不能用力崩開，這(zhe)樣會產生氣(qi)溶膠。

　　⑺任何時候(hou)都(dou)(dou)應該穿(chuan)實驗服和帶手套，手套要(yao)經常更(geng)(geng)換，尤其在抽提過程中(zhong)每一步之間(jian)(jian)都(dou)(dou)要(yao)更(geng)(geng)換。實驗服要(yao)專門用于樣品準備間(jian)(jian)，經常清(qing)洗。

　　2、樣品準備(bei)和(he)RNA-PCRRNA-PCR的(de)額外(wai)步(bu)驟需要額外(wai)的(de)樣品操作，這樣增加(jia)了樣品之(zhi)間(jian)污染的(de)機會。為(wei)了避免這一問(wen)題，反(fan)轉(zhuan)錄一步(bu)可以在(zai)樣品準備(bei)區進行。在(zai)RNA-PCR中(zhong)應用UNG以防(fang)止污染的(de)方法也(ye)有(you)報道。

　　3、建立前PCR區。

　　該去(qu)專門(men)用于準(zhun)備各種(zhong)反應，這個區(qu)域必(bi)須保持(chi)干凈，而且(qie)沒(mei)有來自克隆和樣品準(zhun)備的污(wu)染。前PCR區(qu)必(bi)須要有試劑和準(zhun)備，特別是(shi)專門(men)用于前PCR區(qu)的正壓活塞式移液管。

　　4、PCR實驗室試劑(ji)的操作。

　　⑴所(suo)用的所(suo)有溶液都應(ying)該(gai)沒有核酸和(或)核酸酶(DNase和RNase)污(wu)染。

　　⑵所有(you)PCR試劑(ji)中使用(yong)的水都應(ying)該是(shi)高(gao)(gao)質量(liang)的-新鮮(xian)蒸餾的去離子(zi)水，用(yong)0.22μm過(guo)濾(lv)的，并且是(shi)高(gao)(gao)壓滅菌。

　　⑶在(zai)20℃到25℃貯存的(de)試劑(ji)建議(yi)加點像疊氮(dan)鈉(na)(na)一(yi)類的(de)抗微生(sheng)物劑(ji)，在(zai)擴增試劑(ji)或(huo)樣品制(zhi)(zhi)備(bei)試劑(ji)中加入0.025%的(de)疊氮(dan)鈉(na)(na)不(bu)抑(yi)制(zhi)(zhi)擴增反應。

　　⑷所用試(shi)劑(ji)都應該以大體積(ji)配制，實驗(yan)一下看試(shi)劑(ji)是(shi)否滿意，然后分(fen)裝成僅夠一次使(shi)用的量(liang)進(jin)行(xing)貯存。

　　⑸所有試劑和樣品準備(bei)過程中都要使用(yong)一次性(xing)滅菌的(de)瓶子(zi)和管子(zi)。

　　⑹新(xin)(xin)配制的試(shi)劑在(zai)用于(yu)準備(bei)新(xin)(xin)的標本(ben)之(zhi)前應該加以檢(jian)驗(yan)。

　　⑺樣品準備和前PCR區所使(shi)(shi)用(yong)的移液管在不使(shi)(shi)用(yong)時都(dou)應(ying)該(gai)小心保存。

　　5、在(zai)前PCR區建立PCR混合物。

　　⑴可以把即刻可用的(de)“主混(hun)合物”溶液配好(hao)、分裝并保存(cun)在(zai)-20℃或4℃，在(zai)實驗室只涉及到擴增(zeng)一種或少數幾種特異序(xu)列時這(zhe)樣做很有用。

　　⑵如果你的實驗室使(shi)用多套引物(wu)，以致(zhi)于(yu)配制包括(kuo)所有試(shi)劑(ji)的單一(yi)(yi)反應(ying)混合物(wu)不夠(gou)經濟(ji)，可以考慮分(fen)裝保存(cun)夠(gou)一(yi)(yi)天的PCR成分(fen)。

　　⑶作為一個規(gui)則，應(ying)該保存一套陰性(xing)、弱陽性(xing)和強(qiang)陽性(xing)對照樣(yang)品(pin)來(lai)(lai)分析樣(yang)品(pin)配制和PCR前過(guo)程(cheng)的效率(lv)和潔凈程(cheng)度。而且，你也希望通過(guo)使用一個已(yi)知的弱陽性(xing)樣(yang)品(pin)來(lai)(lai)驗(yan)證你的樣(yang)品(pin)緩沖液(ye)以證明(ming)里面不含擴(kuo)增(zeng)抑(yi)制物。

　　⑷陰性樣品(pin)要與(yu)(yu)每(mei)組樣品(pin)同(tong)時做，以分析是(shi)否存在樣品(pin)與(yu)(yu)樣品(pin)之間的(de)污(wu)(wu)染(ran)(ran)以及是(shi)否存在PCR產(chan)物(wu)的(de)污(wu)(wu)染(ran)(ran)，陰性對照應該包括(kuo)核酸以外的(de)所有試劑。

　　⑸當做陽性對照(zhao)時(shi)，有兩個理由決定(ding)了應該使用(yong)最少數量的核酸。

　　⑹由于(yu)必須(xu)有對(dui)照反應，對(dui)照模板的(de)特點應該(gai)予以考慮(lv)。

　　6、控制污染(ran)的方法。

　　已設計出很(hen)有(you)力的(de)酶學方(fang)法用來消(xiao)(xiao)除一(yi)種(zhong)(zhong)形式的(de)污染(ran)(ran)—使用UNG，這一(yi)技術(shu)能有(you)效地消(xiao)(xiao)除由PCR產物引(yin)起(qi)的(de)污染(ran)(ran)。另(ling)一(yi)種(zhong)(zhong)控制污染(ran)(ran)的(de)方(fang)法是使用紫外線，這種(zhong)(zhong)方(fang)法不能完全消(xiao)(xiao)除污染(ran)(ran)問題，但可以將污染(ran)(ran)降低幾個(ge)數量級。

　　7、后(hou)PCR區PCR完成以后(hou)，需要分析(xi)樣品并解(jie)釋數(shu)據，應(ying)該留出一個專(zhuan)門用(yong)(yong)于(yu)反應(ying)后(hou)處(chu)理樣品的(de)(de)地方。后(hou)PCR活(huo)(huo)動(dong)中使(shi)用(yong)(yong)的(de)(de)所用(yong)(yong)試劑、一次(ci)性耗材和儀器都必須(xu)是(shi)專(zhuan)門用(yong)(yong)于(yu)這一目(mu)的(de)(de)，決不(bu)能(neng)把(ba)實驗室這一區域的(de)(de)試劑或儀器用(yong)(yong)于(yu)任何前PCR活(huo)(huo)動(dong)。