PCR實驗室的基礎知識
PCR實驗室(shi)又(you)叫基因(yin)擴增實驗室(shi)。PCR是(shi)聚合酶(mei)鏈式反應(Polymerase Chain Reaction)的(de)簡稱。是(shi)一種(zhong)分子生物(wu)(wu)學技術,用于放大特定的(de)DNA片(pian)段,可看(kan)作(zuo)生物(wu)(wu)體外的(de)特殊DNA復制。通過DNA基因(yin)追蹤系統(tong),能迅速掌(zhang)握患(huan)者(zhe)體內的(de)病毒含量(liang),其精確(que)度高達(da)納米(mi)級別(bie)。PCR實驗室(shi)的(de)建立方法如下:
1、建立(li)樣(yang)品(pin)(pin)準(zhun)備(bei)區:專門用(yong)(yong)(yong)作(zuo)樣(yang)品(pin)(pin)的(de)(de)(de)準(zhun)備(bei),在(zai)制備(bei)和(he)(he)操(cao)(cao)作(zuo)用(yong)(yong)(yong)于核(he)酸提取的(de)(de)(de)試劑(ji)時應(ying)(ying)該(gai)(gai)采取預防(fang)措施(shi):⑴PCR產(chan)物和(he)(he)帶有(you)要擴增序列的(de)(de)(de)DNA克(ke)隆不(bu)能(neng)在(zai)這個(ge)房間(jian)(jian)操(cao)(cao)作(zuo)。⑵組(zu)織培養物、組(zu)織標本和(he)(he)血清樣(yang)品(pin)(pin)都帶進樣(yang)品(pin)(pin)準(zhun)備(bei)間(jian)(jian)處理,以根據應(ying)(ying)用(yong)(yong)(yong)的(de)(de)(de)需要提取DNA或(huo)RNA。⑶用(yong)(yong)(yong)于樣(yang)品(pin)(pin)處理的(de)(de)(de)工具不(bu)能(neng)被用(yong)(yong)(yong)作(zuo)普通分子(zi)克(ke)隆的(de)(de)(de)工具,也不(bu)能(neng)用(yong)(yong)(yong)作(zuo)操(cao)(cao)作(zuo)靶序列。⑷DNA樣(yang)品(pin)(pin)應(ying)(ying)該(gai)(gai)用(yong)(yong)(yong)有(you)專門的(de)(de)(de)防(fang)護或(huo)正壓活塞式移液管操(cao)(cao)作(zuo),以防(fang)止在(zai)吸取樣(yang)品(pin)(pin)時有(you)氣(qi)溶(rong)膠(jiao)(jiao)遺(yi)留。⑸大(da)體(ti)積樣(yang)品(pin)(pin)應(ying)(ying)該(gai)(gai)用(yong)(yong)(yong)單獨(du)包裝(zhuang)的(de)(de)(de)無菌一次性(xing)移液管吸取。⑹管子(zi)打開(kai)前都要簡短(duan)離心以減少氣(qi)溶(rong)膠(jiao)(jiao)的(de)(de)(de)產(chan)生,而且管子(zi)不(bu)能(neng)用(yong)(yong)(yong)力崩開(kai),這樣(yang)會(hui)產(chan)生氣(qi)溶(rong)膠(jiao)(jiao)。⑺任何時候都應(ying)(ying)該(gai)(gai)穿實(shi)驗(yan)服和(he)(he)帶手套,手套要經常更(geng)換,尤其(qi)在(zai)抽提過程中每(mei)一步之(zhi)間(jian)(jian)都要更(geng)換。實(shi)驗(yan)服要專門用(yong)(yong)(yong)于樣(yang)品(pin)(pin)準(zhun)備(bei)間(jian)(jian),經常清洗。
2、樣(yang)品(pin)(pin)準備和RNA-PCR RNA-PCR的(de)額(e)外步(bu)(bu)驟需要(yao)額(e)外的(de)樣(yang)品(pin)(pin)操(cao)作,這(zhe)(zhe)樣(yang)增加了樣(yang)品(pin)(pin)之(zhi)間污染的(de)機會。為了避免這(zhe)(zhe)一問題,反轉錄一步(bu)(bu)可以在樣(yang)品(pin)(pin)準備區(qu)進行。在RNA-PCR中(zhong)應用UNG以防止污染的(de)方法也有報道。
3、建立前(qian)PCR區(qu):專門(men)用于準備各(ge)種(zhong)反(fan)應,這個區(qu)域必須保(bao)持干凈,而且沒有來自(zi)克隆和(he)樣品(pin)準備的污染。前(qian)PCR區(qu)必須要有試劑和(he)準備,特別是專門(men)用于前(qian)PCR區(qu)的正壓活塞(sai)式移液管